Цитохимический метод

Цитохимический метод выявления и изучения фосфатаз был предложен в 1939 г. Gomori. Этот метод предусматривает определение щелочной фосфатазы в цитоплазме лейкоцитов периферической крови. С этой целью мазки крови инкубируются в буферном растворе, содержащем в качестве субстрата фосфорный эфир.

При последующем окрашивании щелочная фосфатаза выявляется в цитоплазме в виде зернистости черного цвета. Другие клетки крови этого фермента не содержат.

Нами произведено цитохимическое исследование активности лейкоцитарной щелочной фосфатазы в мазках периферической крови у детей с болезнью Дауна и у группы здоровых лиц (контрольная группа). Было обследовано 10 больных в возрасте 4 — 16 лет и 10 практически здоровых детей этого же возраста. Определение активности щелочной фосфатазы производилось, по модифицированной методике Gomori.

Приготовлялись мазки периферической крови, которые затем фиксировались, в течение 30 сек спиртово-формалиновым фиксатором. Далее промытые и высушенные мазки инкубировались в термостате при 37° С в течение 3 ч в среде, содержащей глицерофосфат (в качестве субстрата), 2%-ный раствор хлористого кальция, 1,25%-ный раствор сернокислой магнезии, 10%-ный раствор мединала.

После этого мазки окрашивались хлористым кобальтом и сернистым аммонием, а затем производилось до окрашивания мазков краской Романовского. В результате такого окрашивания щелочная фосфатаза выявляется в нейтрофилах в виде гранул преципитата черного цвета. Готовые препараты подвергались микроскопическому исследованию.

В каждом мазке просматривалось 100 нейтрофильных лейкоцитов, причем оценка активности производилась на основании шкалы, предложенной Kaplow, в основе которой лежит интенсивность зернистости цитоплазмы нейтрофилов.


Различные степени активности щелочной фосфатазы в нейтрофилах

Различные степени активности щелочной фосфатазы в нейтрофилах

Различные степени активности щелочной фосфатазы в нейтрофилах

Различные степени активности щелочной фосфатазы в нейтрофилах

Различные степени активности щелочной фосфатазы в нейтрофилах

Микрофотографии. Окраска по Gomori. Ок. 15, об. 90:

а — первая степень ( + );
б — вторая степень ( + );
в — третья степень ( + + + );
г — четвертая степень ( + + + + ).


Показатель активности щелочной фосфатазы вычислялся по формуле Kaplow:

0ха + 1 xb + 2хс + 3xd + 4xе/100

Число клеток каждой группы активности умножалось на порядковый номер этой группы, определялась сумма произведений, которая затем делилась на 100.

При этом активность щелочной фосфатазы выражалась отвлеченным числом. По интенсивности зернистости нейтрофилов, окрашенных по Gomori, удается судить об активности щелочной фосфатазы. В результате проведенных нами исследований оказалось, что у всех детей с болезнью Дауна показатель активности щелочной фосфатазы был повышен.

Активность фермента у больных детей оказалась в 1,5 раза выше, чем у здоровых.

Представляют интерес данные, касающиеся процентного распределения нейтрофилов по их активности в обеих обследованных группах.

«Болезнь Дауна», Е.Ф.Давиденкова

Смотрите также: