Главная / Болезнь Дауна / Патогенетические исследования / Кариологические исследования в лейкоцитах периферической крови были выполнены методом Мурхеда

Кариологические исследования в лейкоцитах периферической крови были выполнены методом Мурхеда

Эта методика состоит в следующем: 10,0 мл крови, полученной из локтевой вены, вводится в стерильную пробирку с гепарином и помещается в холодильник на 30 мин. Затем в боксе в пробирку с кровью добавляется 0,5 мл 10%-ного стерильного раствора желатина. Через 1 ч образовавшаяся в пробирке плазма осторожно отсасывается пипеткой Пастера в мерную пробирку. После этого производится подсчет лейкоцитов в плазме.

К плазме с лейкоцитами добавляются ФГА (фитогемагглютинин «Difco» М или Р) и среда 199. Конечная концентрация клеток в 1 мл среды должна быть равна 1,5 X 106 или 2 X 106.

Производится осторожное взбалтывание смеси с целью получения однородной суспензии, которая потом разливается в пенициллиновые флаконы. Среда насыщается СО2, флаконы закрываются пробками и ставятся в термостат при температуре 37° на 72 ч. За 4 ч до окончания инкубации добавляется колхицин.

Через 72 ч после окончания периода инкубации производится центрифугирование при 1000 об/мин в течение 5 мин. Затем надосадочная жидкость сливается, а к осадку добавляется 0,75%-ный раствор цитрата натрия.

Гипотония проводится при температуре 37° в течение 15 мин. После повторного центрифугирования производится фиксация уксусно-метиловым спиртом (1:3), которая осуществляется при комнатной температуре в течение 10 мин.

При этом осадок тщательно разбивается, а фиксатор трижды меняется. Затем на охлажденные влажные стекла добавляется 2 или 3 капли суспензии клеток и производится быстрое их высушивание над пламенем горелки. Препараты окрашиваются уксуснокислым орсеином.

Микроскопирование и микрофотографирование производится при помощи микроскопов МБИ-3 или МБИ-6. В работе была использована современная международная классификация хромосом человека, разработанная и принятая в Денвере в 1960 г.

Всего изучено 908 метафазных пластинок.
У всех больных, за исключением одного, число хромосом равнялось 47, и определялась типичная трисомия по 21-й хромосоме. Отклонения от модального числа хромосом были незначительными.

«Болезнь Дауна», Е.Ф.Давиденкова

Смотрите также: